ન્યુક્લિક એસિડ સંશ્લેષણના સિદ્ધાંતો

ન્યુક્લીક એસિડ સંશ્લેષણ ઘન તબક્કાના સિઆલિક એમાઈડ ટ્રાઇગ્લિસરાઈડ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને હાથ ધરવામાં આવે છે, જેમાં ડીએનએનો 3′ છેડો ઘન તબક્કાના સબસ્ટ્રેટ પર સ્થિર થાય છે અને જ્યાં સુધી ઇચ્છિત ડીએનએ ટુકડાનું સંશ્લેષણ ન થાય ત્યાં સુધી ન્યુક્લિયોટાઈડ્સ 3′ થી 5′ દિશામાં ઉમેરવામાં આવે છે. .આ ડીએનએ પોલિમરેઝના ઉપયોગ દ્વારા ડીએનએ સંશ્લેષણથી અલગ છે.

પ્રથમ પાયાનો 3′ છેડો સંશ્લેષણ દરમિયાન CPG પર સ્થિર થાય છે, આગામી આધારનો 5′-OH ડી-પી-ટોલીલ ટ્રાયટીલ ડીએમટી સાથે સુરક્ષિત છે, આધાર પરનો એમિનો જૂથ બેન્ઝોઈક એસિડ અને 3′ સાથે સુરક્ષિત છે. -ઓએચ પછી એમિનો ફોસ્ફેટ સંયોજન સાથે સક્રિય થાય છે.1 બેઝના 5 5′-OH માંથી 1 અને પછીના આધારનો 3′-OH ફોસ્ફાઈટ ટ્રાઈગ્લિસરાઈડ બનાવે છે, જે પછી ફોસ્ફેટ ટ્રાઈગ્લિસરાઈડમાં આયોડિન વડે ઓક્સિડાઇઝ થાય છે, બીજા બેઝ 5′-OH પરના રક્ષક દ્વારા દૂર કરવામાં આવે છે. આગામી બેઝના ઉમેરા દ્વારા ડિક્લોરોએસેટિક એસિડ ડીએમ ચક્ર ઉમેરવું, અને સંશ્લેષણ પછી 5′-OH પરના પ્રોટેક્ટન્ટને નબળા એસિડથી દૂર કરવામાં આવે છે. ટુકડો ઘન રેઝિનથી કેન્દ્રિત એમોનિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ સાથે ડિસ્કનેક્ટ થાય છે, રક્ષકને પાયામાંથી દૂર કરવામાં આવે છે. હીટિંગ હેઠળ કેન્દ્રિત એમોનિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ સાથે, એમોનિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ દૂર કરવામાં આવે છે, ટુકડાને વેક્યૂમ સૂકવવામાં આવે છે, અને ન્યુક્લિક એસિડ પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફી અથવા PAGE દ્વારા શુદ્ધ કરવામાં આવે છે.

ઓલિગો સિન્થેસિસના પગલાં

અવરોધિત કરી રહ્યું છે

આTCA સોલ્યુશન ઉમેરીને 5 એન્ડ DMT પ્રોટેક્ટીંગ ગ્રૂપ દૂર કરવામાં આવે છે.

સક્રિયકરણ

સક્રિય ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ મોનોમર મધ્યવર્તી બનાવવા માટે ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ મોનોમર સાથે એક્ટિવેટરનું મિશ્રણ.

કપલિંગ

5-ટર્મિનલ હાઇડ્રોક્સિલ જૂથ અસ્થિર ફોસ્ફાઇટ ટ્રાઇગ્લાઇસેરાઇડ બોન્ડ બનાવવા માટે એન્ટિ-જનરેટિવ કન્ડેન્સેશન પ્રતિક્રિયામાં સક્રિય ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ મધ્યવર્તી સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે.

કેપિંગ 

કેપિંગ એજન્ટનો ઉમેરો વધારાના હાઇડ્રોક્સિલ જૂથો સાથે એસિટિલેશન કેપિંગ પ્રતિક્રિયા કરે છે જે કન્ડેન્સેશન પ્રતિક્રિયામાં સામેલ નથી.

ઓક્સિડેશન 

પાણી ધરાવતા આયોડિન દ્રાવણનો ઉમેરો અસ્થિર ફોસ્ફાઈટ બોન્ડ સાથે ઓક્સિડેશન દ્વારા પ્રતિક્રિયા આપે છે અને સ્થિર ફોસ્ફોરિક એસિડ ટ્રાઈગ્લિસરાઈડ બોન્ડ બનાવે છે.

સાયનોઇથિલ ક્લીવેજ

ફોસ્ફેટ ટ્રાઇગ્લિસેરાઇડ બોન્ડમાંથી સાયનોઇથિલ જૂથને દૂર કરવા માટે ડીઇએ સોલ્યુશનના ઉમેરા સાથે સંશ્લેષણ પછી ન્યુક્લિક એસિડ ઉત્પાદન.

ક્લીવ્ડ એન્ડ ડિપ્રોટેક્શન

ન્યુક્લીક એસિડના ટુકડાઓને ઘન તબક્કાના વાહકમાંથી એક કેન્દ્રિત એમોનિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ સોલ્યુશન ઉમેરીને વિભાજિત કરવામાં આવે છે અને પછી પાયાના હાઇડ્રોજન બોન્ડ્સમાંથી રક્ષણાત્મક જૂથોને દૂર કરવા માટે ગરમ કરવામાં આવે છે.